实验原理

ELISA是基于免疫学上抗原与抗体特异性结合的原理，对目标抗原进行检测的方法。产品所用96孔板预埋有捕获抗体，能够准确结合目的抗原并使之固定。再加入结合有生物素的检测抗体，检测抗体能与抗原上捕获抗体结合位点以外的靶点结合。检测抗体结合streptavidin-hrp以及TMB，产生荧光。通过吸光度绘制标准曲线后，比对可检测生物大分子的含量。本产品的结果准确，灵敏度高，可用于检测人细胞或组织裂解液以及细胞培养液上清液中的IL-6。

靶标信息

IL-6是一种多功能细胞因子，对炎症、免疫反应和造血具有多效性作用。在炎症初始阶段，IL-6可通过血液进入肝脏，诱导多种蛋白合成。同时，IL-6减少纤维连接蛋白、白蛋白和转铁蛋白产生。此外，IL-6通过调控铁、锌转运体参与血清铁、锌含量的调节。当IL-6到达骨髓时，会促进巨核细胞成熟。IL-6参与了多种疾病的发生，比如刺激RANKL，导致骨吸收和骨质疏松；诱导VEGF过度生成，引起类风湿性关节炎；促进角质细胞增殖，致使系统性硬化患者皮肤变化等。

产品信息

产品名称：Human IL-6 ELISA Kit

产品规格：96 tests

反应类别：sandwich

样品检测体积：Plasma=50 µL, Serum=50 µL, Supernatant=50 µL

检测灵敏度：0.92pg/ml

检测范围：1.56pg/ml-100pg/ml

检测时间：3h 10min

实验步骤：two step assay

种属反应：Human

检测抗体结合物：biotin

产品组件

样品准备

1、细胞培养液离心后取上清。

2、细胞或组织裂解液裂解后取上清液。

3、样品用样品标准稀释液稀释至一半浓度。

4、样品使用前平衡至室温。

实验准备

1、试剂盒使用前置于室温平衡20分钟，使用后置于4℃保存。

2、洗涤液使用ddH2O稀释至1x。

3、标准品制备：

    1.按标签要求溶解标准品，浓度为4000pg/ml。

    2.取8支EP管，在管中加入标准品稀释液250ul。

    3.在第一管中加入250ul标准品溶液，然后取第一管中稀释后标准品溶液250ul加入第二管，并以此类推，直至加入到倒数第二管（即保留最后一管，其中仅含标准品稀释液）。

    4.得到浓度梯度：2000、1000、500、250、125、62.5、31.25、0pg/ml。

实验步骤

1、取合适数量的微孔条。

2、每孔使用400ul1x洗涤液，静置30s后弃洗涤液，重复5次，最后一次洗涤后拍干96孔板以防止气泡留存。

3、在96孔板中加入各浓度标准品100ul，样品100ul，以及一空孔作为对照。推荐做两份减小误差。

4、使用封板膜封板，在室温孵育2小时。

5、去封板膜，弃液，重复步骤2、。

6、加入生物素结合检测抗体100ul。

7、使用封板膜封板，在室温孵育1小时

8、去封板膜，弃液，重复步骤2、

9、每孔加入HRP-conjugated reagents 100ul

10、使用封板膜封板，在室温孵育0.5小时

11、去封板膜，弃液，重复步骤2、

12、每孔加入TMB底物溶液100ul

13、使用封板膜封板，在37℃避光孵育30分钟

14、去封板膜，每孔加入终止液50ul

15、测量每孔吸光度，绘制标准曲线，计算样品浓度

标准曲线参考

注意事项

1、标准品不可回收

2、显色剂对人体有害，避免直接接触人体

3、显色剂出现浑浊或变色后不能继续使用

4、实验时控制温度在室温为宜

5、实验时枪头不能接触孔板

6、洗涤过程不充分会对实验结果产生较大影响

7、加样过程避免产生气泡

保存条件

产品除显色剂外储存于4℃，保质期6个月。

显色剂需要避光保存于-20℃，保质期6个月，如保存于4℃则仅两周内有效。